An druga anthelmintic N,N-diethyl-m-tolúimíd (DEET) tuairiscítear go gcuireann sé bac ar AChE (acetylcholinesterase) agus go bhfuil airíonna carcanaigineacha féideartha aige de bharr soithíoch iomarcach. Sa pháipéar seo, léirímid go spreagann DEET go sonrach cealla endothelial a chuireann angiogenesis chun cinn, rud a mhéadaíonn fás siadaí. Gníomhaíonn DEET próisis cheallacha as a dtagann angiogenesis, lena n-áirítear iomadú, imirce agus greamaitheacht. Tá baint aige seo le táirgeadh NÍL méadaithe agus léiriú VEGF i gcealla endothelial. Chuir tost M3 nó úsáid a bhaint as coscairí cógaseolaíochta M3 deireadh leis na héifeachtaí seo go léir, rud a thugann le tuiscint go bhfuil angiogenesis de bharr DEET-íogair M3-íogair. Léiríonn turgnaimh a bhaineann le comharthaíocht cailciam i gcealla endothelial agus HEK a sháraíonn gabhdóirí M3, chomh maith le staidéir cheangailteach agus dugála, go bhfeidhmíonn DEET mar mhodúlóir allosteric de ghabhdóirí M3. Ina theannta sin, cuireann DEET bac ar AChE, rud a mhéadaíonn bith-infhaighteacht aicéitililín agus a cheangailteach le gabhdóirí M3, agus cuireann sé le hiarmhairtí proangaigineacha trí rialáil allosteric.
Bhí ECS bunscoile scoite amach ó aorta lucha na hEilvéise. Rinneadh an modh eastósctha a oiriúnú ó phrótacal Kobayashi 26 . Saothraíodh ECS Murine i meán EBM-2 arna fhorlíonadh le FBS teas-dhíghníomhaithe 5% go dtí an ceathrú sliocht.
Rinneadh anailís ar éifeacht dhá chomhchruinniú DEET ar iomadú HUVEC, U87MG, nó BF16F10 agus úsáid á baint as Kit Measúnachta Iomadú Cealla CyQUANT (Tóraigh Mhóilíneach, C7026). Go hachomair, cuireadh 5.103 ceall in aghaidh an tobair i bpláta 96-tobar, ceadaíodh iad a cheangal thar oíche, agus ansin cóireáilte le DEET ar feadh 24 h. Tar éis duit an meán fáis a bhaint, cuir tuaslagán ceangailteach ruaime le gach tobar den mhicreaplate agus gor na cealla ag 37 °C ar feadh 30 nóiméad. Socraíodh leibhéil fhluaraiseachta ag baint úsáide as léitheoir micreaphláta ilmhód Mithras LB940 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, an Ghearmáin) atá feistithe le scagairí excitation 485 nm agus scagairí astaíochta 530 nm.
Síolaíodh HUVEC i bplátaí 96 tobar ag dlús 104 cill in aghaidh an tobair. Cuireadh cóireáil ar chealla le DEET ar feadh 24 h. Rinneadh measúnú ar inmharthanacht na gceall trí úsáid a bhaint as measúnacht dathmhéadrach MTT (Sigma-Aldrich, M5655). Fuarthas luachanna dlús optúla ar léitheoir microplate multimode (Mithras LB940) ag tonnfhad 570 nm.
Rinneadh staidéar ar éifeachtaí DEET ag baint úsáide as measúnachtaí angiogenesis in vitro. Mhéadaigh cóireáil le 10-8 M nó 10-5 M DEET foirmiú fad ribeach i HUVECs (Fíor 1a, b, barraí bán). I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, léirigh cóireáil le tiúchan DEET ó 10-14 go 10-5 M gur shroich an fad ribeach ardchlár ag 10-8 M DEET (Fíor Forlíontach S2). Ní bhfuarthas aon difríocht shuntasach san éifeacht in vitro proangiogenic de HUVECanna a chóireáiltear le DEET sa raon tiúchana 10-8 M agus 10-5 M.
Chun éifeacht DEET ar neovascularization a chinneadh, rinneamar staidéir neovascularization in vivo. Tar éis 14 lá, léirigh lucha instealladh le cealla endothelial precultured le 10-8 M nó 10-5 M DEET méadú suntasach ar ábhar haemaglóibin (Fíor 1c, barraí bán).
Ina theannta sin, rinneadh staidéar ar neovascularization de bharr DEET i lucha a bhfuil xenograft orthu U87MG a instealladh laethúil (ip) le DEET ag dáileog arbh eol dó tiúchain plasma 10-5 M a aslú, rud atá gnáth i ndaoine nochta. i 23. Breathnaíodh siadaí inbhraite (ie siadaí >100 mm3) 14 lá tar éis cealla U87MG a instealladh isteach i lucha. Ag an 28ú lá, cuireadh feabhas suntasach ar fhás siadaí i lucha a raibh cóireáil déanta orthu ag DEET i gcomparáid le lucha rialaithe (Fíor 1d, cearnóga). Ina theannta sin, léirigh staining CD31 siadaí gur mhéadaigh DEET go suntasach achar ribeach ach níor mhéadaigh sé dlús micrea-soithí. (Fíor 1e–g).
Chun ról na ngabhdóirí muscarinic in iomadú spreagtha DETA a chinneadh, baineadh úsáid as 10-8 M nó 10-5 M DETA i láthair pFHHSiD (10-7 M, antagonist receptor M3 roghnach). Cóireáil HUVEC. Chuir pFHHSiD bac iomlán ar airíonna iomadaithe DETA ag gach tiúchan (Tábla 1).
Faoi na coinníollacha seo, scrúdaíomar freisin an méadódh DEET fad ribeach i gcealla HUVEC. Ar an gcaoi chéanna, chuir pFHHSiD cosc suntasach ar fhad ribeach DEET-spreagtha (Fíor 1a, b, barraí glasa). Ina theannta sin, rinneadh turgnaimh den chineál céanna le siRNA M3. Cé nach raibh an siRNA rialaithe éifeachtach chun foirmiú ribeach a chur chun cinn, chuir tosta an receptor muscarinic M3 deireadh le cumas DEET chun fad ribeach a mhéadú (Fíor 1a, b, barraí dubha).
Ina theannta sin, chuir pFHHSiD (Fíor 1c, d, ciorcail) bac iomlán ar vascularization in vitro 10-8 M nó 10-5 M DEET-spreagtha in vitro agus neovascularization in vivo. Léiríonn na torthaí seo go gcuireann DEET angiogenesis chun cinn trí chonair atá íogair d’antagonists receptor M3 roghnach nó siRNA M3.
Is é AChE sprioc mhóilíneach DEET. Is féidir le drugaí ar nós donepezil, a fheidhmíonn mar choscóirí AChE, angaigéineas an CE in vitro agus i múnlaí ischemia géag luiche a spreagadh14. Rinneamar tástáil ar éifeacht dhá thiúchan DEET ar ghníomhaíocht einsím AChE in HUVEC. Laghdaigh tiúchan íseal (10-8 M) agus ard (10-5 M) de DEET gníomhaíocht AChE endothelial i gcomparáid le coinníollacha rialaithe (Fíor 2).
Laghdaigh an dá thiúchan DEET (10-8 M agus 10-5 M) gníomhaíocht acetylcholinesterase ar HUVEC. Baineadh úsáid as BW284c51 (10-5 M) mar rialú ar choscóirí acetylcholinesterase. Cuirtear torthaí in iúl mar chéatadán de ghníomhaíocht AChE ar HUVEC cóireáilte leis an dá thiúchan DEET i gcomparáid le cealla atá cóireáilte le feithiclí. Cuirtear luachanna in iúl mar mheán ± SEM de shé thurgnamh neamhspleácha. *p < 0.05 i gcomparáid le rialú (tástáil iolrach Kruskal-Wallis agus Dunn).
Tá baint ag ocsaíd nítreach (NO) sa phróiseas angóigineach 33, dá bhrí sin, rinneadh staidéar ar tháirgeadh NÍL i HUVECanna spreagtha DEET. Méadaíodh táirgeadh NÍL endothelial cóireáilte DEET i gcomparáid le cealla rialaithe, ach níor shroich sé tábhacht ach amháin ag dáileog de 10-8 M (Fíor 3c). Chun na hathruithe móilíneacha a rialaíonn táirgeadh NÍL spreagtha ag DEET a chinneadh, rinne blotáil an Iarthair anailís ar léiriú agus gníomhachtú eNOS. Cé nár athraigh cóireáil DEET léiriú eNOS, mhéadaigh sé go suntasach fosfarylation eNOS ag a láithreán gníomhachtúcháin (Ser-1177) agus laghdaigh sé a shuíomh coisctheach (Thr-495) i gcomparáid le cealla neamhchóireáilte i eNOS phosphorylation (Fíor 3d). Ina theannta sin, ríomhadh an cóimheas idir eNOS fosfarylated ag an suíomh gníomhachtaithe agus an suíomh coisctheach tar éis an méid eNOS fosfarylated a normalú go dtí méid iomlán na heinsíme. Méadaíodh an cóimheas seo go suntasach i HUVECanna a ndearnadh cóireáil orthu le gach tiúchan DEET i gcomparáid le cealla neamhchóireáilte (Fíor 3d).
Ar deireadh, rinneadh anailís ar léiriú VEGF, ceann de na príomhfhachtóirí pró-angiogéineacha, trí Western blotting. Mhéadaigh DEET léiriú VEGF go suntasach, ach chuir pFHHSiD bac iomlán ar an léiriú seo.
Ós rud é go bhfuil éifeachtaí DEET íogair ó thaobh imshuí cógaseolaíochta agus íosrialú gabhdóirí M3 araon, rinneamar tástáil ar an hipitéis go bhféadfadh DEET comharthaíocht cailciam a fheabhsú. Is ionadh é gur theip ar DEET cailciam cíteaplasmach a mhéadú in HUVEC (sonraí gan a bheith léirithe) agus HEK/M3 (Fíor 4a, b) don dá thiúchan a úsáideadh.
Am postála: Dec-30-2024