Gníomhaíonn fosfarylation an máistir-rialtóir fáis DELLA, ag cur chun cinn histone H2A ceangailteach le crómatin in Arabidopsis.

Caomhnaítear próitéiní DELLArialtóirí fáisa bhfuil ról lárnach acu i bhforbairt plandaí mar fhreagra ar chomharthaí inmheánacha agus seachtracha. Mar rialtóirí tras-scríbhinne, ceanglaíonn DELLAanna le fachtóirí trascríobh (TFanna) agus histone H2A trína bhfearainn GRAS agus earcaítear iad chun gníomhú ar thionscnóirí. Tá sé léirithe ag staidéir le déanaí go ndéantar cobhsaíocht DELLA a rialáil go hiar-aistriúcháin trí dhá mheicníocht: polyubiquitination a tharlódh leis an hormone plandaí.gibberellin, as a dtagann a ndíghrádú tapa, agus conjugation le modhnóir beag cosúil le ubiquitin (SUMO), a ardaíonn a carnadh. Ina theannta sin, tá gníomhaíocht DELLA á rialú go dinimiciúil ag dhá mheicníocht ar leith glycosylation: feabhsaíonn O-fucosylation idirghníomhaíocht DELLA-TF, ach cuireann modhnú N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) O-nasctha bac ar idirghníomhaíocht DELLA-TF. Mar sin féin, níl ról fosfarylation DELLA soiléir mar gur léirigh staidéir roimhe seo torthaí contrártha, le roinnt daoine ag rá go gcuireann fosfarylation díghrádú DELLA chun cinn nó go gcuireann sé cosc ​​​​ar dhíghrádú DELLA agus go dtugann daoine eile le tuiscint nach gcuireann fosfarylation isteach ar a gcobhsaíocht. Anseo, sainaithnímid suíomhanna fosfarylation san athbhrúiteoir GA1-3 (RGA), AtDELLA, íonaithe ó Arabidopsis thaliana ag mais-speictriméadracht agus léirímid go gcuireann fosfarylation de dhá pheptídí RGA sna réigiúin PolyS agus PolyS / T le gníomhaíocht RGA trí cheangal H2A agus comhlachas RGA le tionscnóirí sprice a chur chun cinn. Go háirithe, níor chuir fosfarylation isteach ar idirghníomhaíochtaí RGA-TF ná ar chobhsaíocht RGA. Nochtann ár staidéar meicníocht mhóilíneach trína spreagann fosfarylation gníomhaíocht DELLA.
Léirigh ár n-anailís mais-speictriméadrach go raibh Pep1 agus Pep2 araon an-fosfarylated in RGA i gcúlra GA1-easnamhach. Chomh maith leis an staidéar seo, léirigh staidéir phosphoproteomic freisin fosfarylation Pep1 in RGA, cé nach bhfuil staidéar déanta fós ar a ról53,54,55. I gcodarsnacht leis sin, níor tugadh cur síos ar phosphorylation Pep2 roimhe seo ós rud é nach bhféadfaí an peptide seo a bhrath ach ag baint úsáide as an transgene RGAGKG. Cé gur laghdaigh an sóchán m1A, a chuir deireadh le fosfarylation Pep1, gníomhaíocht RGA beagán i bplanda, bhí éifeacht bhreise aige nuair a bhí sé in éineacht le m2A chun gníomhaíocht RGA a laghdú (Fíor Forlíontach 6). Go tábhachtach, laghdaíodh fosphorylation Pep1 go suntasach sa tsóiteáin sly1 feabhsaithe GA i gcomparáid le ga1, rud a thugann le tuiscint go gcuireann GA chun cinn dephosphorylation RGA, ag laghdú a ghníomhaíochta. Tá gá le himscrúdú breise a dhéanamh ar an meicníocht trína gcuireann GA faoi chois fosfarylation RGA. Féidearthacht amháin is ea go mbaintear é seo amach trí kinase próitéine neamhaitheanta a rialáil. Cé gur léirigh staidéir go bhfuil léiriú ar an próitéin CK1 kinase EL1 íosrialaithe ag GA i rís41, léiríonn ár dtorthaí nach laghdaíonn sócháin ard-ord an homologue Arabidopsis EL1 (AEL1-4) fosfarylation RGA. I gcomhaontú lenár dtorthaí, níor shainaithin staidéar fosphoproteomic a rinneadh le déanaí a bhain úsáid as línte ró-léirithe Arabidopsis AEL agus an tsóiteáin ael triple aon phróitéiní DELLA mar fhoshraitheanna de na kinases seo56. Nuair a d’ullmhaigh muid an lámhscríbhinn, tugadh le fios gur féidir le GSK3, an ghéin a ionchódaíonn kinase cosúil le GSK3/SHAGGY i gcruithneacht (Triticum aestivum), fosphorylate DELLA (Rht-B1b)57, cé nach bhfuil fosfarylation Rht-B1b ag GSK3 deimhnithe i planta. Léirigh frithghníomhartha einsímeacha in vitro i láthair GSK3 agus anailís mais-speictriméadrachta ina dhiaidh sin trí shuíomh fosfarylation atá suite idir fearainn DELLA agus GRAS de Rht-B1b (Fíor Forlíontach 3). Tháinig laghdú ar ghníomhaíocht Rht-B1b sa chruithneacht trasgenach mar thoradh ar ionaid shrine go alanine ag na trí shuíomh fosfarylation, ag teacht lenár dtorthaí gur laghdaigh ionaid alanine i Pep2 RGA gníomhaíocht RGA. Mar sin féin, léirigh measúnachtaí díghrádaithe próitéine in vitro gur féidir le fosfarylation Rht-B1b57 a chobhsú freisin. Tá sé seo i gcodarsnacht lenár dtorthaí a léiríonn nach n-athraíonn ionaid alanine i Pep2 RGA a chobhsaíocht i bplandaí. Tá GSK3 i cruithneacht ina ortholog de phróitéin brassinosteroid-neamhíogair 2 (BIN2) in Arabidopsis 57. Is rialtóir diúltach é BIN2 ar chomharthaíocht BR, agus gníomhaíonn BR a chonair chomharthaíochta trí dhíghrádú BIN2 a chur faoi deara 58. Léirigh muid nach laghdaíonn cóireáil BR cobhsaíocht RGA 59 nó leibhéil fosfarylation in Arabidopsis (Figiúirí 2) nach dócha go mbeidh RGA in ann a bheith in iúl fosfarlaithe ag BIN2.
Rinneadh anailís staitistiúil ar na sonraí cainníochtúla go léir ag baint úsáide as Excel, agus aimsíodh difríochtaí suntasacha trí úsáid a bhaint as t-thástáil an Mhic Léinn. Níor úsáideadh aon mhodhanna staidrimh chun méid an tsampla a réamhchinneadh. Níor fágadh aon sonraí as an áireamh san anailís; níor rinneadh an turgnamh go randamach; agus bhí na taighdeoirí ar an eolas faoin leithdháileadh le linn an turgnaimh agus an mheasúnaithe toraidh. Soláthraítear méideanna samplacha sna finscéalta figiúirí agus sna comhaid sonraí amh.