Ábhair phlandaí agus pataiginí
Chuir an Dr. Pat Brown in Ollscoil Illinois (anois in UC Davis) daonra mapála comhlachais sorghum ar fáil, ar a dtugtar an daonra comhshó sorghum (SCP). Rinneadh cur síos air roimhe seo agus is bailiúchán de línte éagsúla é atá tiontaithe go neamhíogaireacht fóta-thréimhse agus airde níos lú chun fás agus forbairt na bplandaí i dtimpeallachtaí SAM a éascú. Baineadh úsáid as 510 líne ón daonra seo sa staidéar seo, cé gur mar gheall ar dhroch-phéacadh agus saincheisteanna rialaithe cáilíochta eile, níor úsáideadh na línte go léir in anailís na dtrí thréith. Sa deireadh, baineadh úsáid as sonraí ó 345 líne chun anailís a dhéanamh ar an bhfreagairt chitin, 472 líne don bhfreagairt flg22, agus 456 le haghaidh friotaíocht TLS.B. cookeiFuarthas an strain LSLP18 ón Dr. Burt Bluhm in Ollscoil Arkansas.
Tomhas freagartha MAMP
Baineadh úsáid as dhá MAMP éagsúla sa staidéar seo flg22, (catalóg Genscript # RP19986), agus chitin. Fásadh plandaí sorghum i n-ionchuir a leagadh ar leaca líonta le hithir (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) sa cheaptha teasa. Uiscíodh na plandaí an lá roimh bhailiú an tsampla chun taise bhreise duille a sheachaint ar lá an bhailithe.
Rinneadh na línte a randamú agus, ar chúiseanna lóistíochta, cuireadh iad i mbaisceanna de 60 líne. I ngach líne, cuireadh trí 'phota' le dhá shíol in aghaidh na líne. Cuireadh baisceanna ina dhiaidh sin a luaithe a bhí an bhaisc roimhe sin próiseáilte go dtí go raibh an daonra iomlán measúnaithe. Rinneadh dhá rith turgnamhacha do na MAMPanna araon agus na géinitíopaí ath-randamacha i ngach ceann den dá rith.
Rinneadh measúnuithe ROS mar a thuairiscíodh roimhe seo. Go hachomair, i ngach líne, cuireadh sé shíol i dtrí phota éagsúla. Ó na síológa a tháinig as, roghnaíodh trí cinn bunaithe ar aonfhoirmeacht. Níor úsáideadh síológa a raibh cuma neamhghnách orthu nó a bhí i bhfad níos airde nó níos giorra ná an tromlach. Gearradh ceithre dhiosca duille de thrastomhas 3 mm as an gcuid is leithne den 4ú duilleog de thrí phlanda sorghum éagsúla 15 lá d'aois. Diosca amháin in aghaidh an duilleoige ó dhá phlanda agus dhá dhiosca ó phlanda amháin, agus an dara diosca mar rialú uisce (féach thíos). Snámhadh na dioscaí ina n-aonar ar 50 µl H20 i bpláta dubh 96-tobair, séalaíodh iad le séala alúmanaim chun nochtadh don solas a sheachaint, agus coinníodh iad ag teocht an tseomra thar oíche. An mhaidin dár gcionn, rinneadh tuaslagán imoibrithe ag baint úsáide as tóireadóir ceimiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, uimhir chatalóige 120-04891), 2 mg/ml peirocsaídáis raidis capaill (Cineál VI-A, Sigma-Aldrich, uimhir chatalóige P6782), agus 100 mg/ml Citiin nó 2 μM de Flg22. Cuireadh 50 µl den tuaslagán imoibrithe seo le trí cinn de na ceithre thobar. Rialú bréige a bhí sa cheathrú tobar, agus cuireadh an tuaslagán imoibrithe gan an MAMP san áireamh leis. Cuireadh ceithre thobar bána ina raibh uisce amháin i ngach pláta freisin.
Tar éis an tuaslagán imoibrithe a chur leis, tomhaiseadh an lonrúlacht ag baint úsáide as léitheoir micreaphlátaí il-bhrath SynergyTM 2 (BioTek) gach 2 nóiméad ar feadh 1 uair an chloig. Tógann an léitheoir pláta tomhais lonrúlachta gach 2 nóiméad le linn na huaire seo. Ríomhadh suim na 31 léamh go léir chun luach gach tobar a thabhairt. Ríomhadh an luach measta don fhreagairt MAMP do gach géinitíopa mar (meánluach lonrúlachta na dtrí thobar turgnamhacha - luach an tobair bréige) - lúide meánluach an tobair bháin. Bhí luachanna na dtobair bháin gar do náid i gcónaí.
Dioscaí duilleNicotiana benthamiana, cuireadh líne sorgham amháin a raibh freagrúlacht ard aici (SC0003), agus líne sorgham amháin a raibh freagrúlacht íseal aici (PI 6069) san áireamh mar rialuithe i ngach pláta 96-tobar chun críocha rialaithe cáilíochta.
B. cookeiullmhú agus ionaclú
B. cookeiUllmhaíodh an t-ionaclóir mar a thuairiscíodh roimhe seo. Go hachomair, sáithíodh gráin sorghum in uisce ar feadh trí lá, sruthlaíodh iad, cuireadh i bhfleascáin chónúla 1L iad agus rinneadh iad a uathchlabhú ar feadh uair an chloig ag 15psi agus 121 °C. Ansin ionacladh na gráin le thart ar 5 ml de mhícéilia maceráilte ó chultúr úr deB. cookeiDéantar aonrúcháin LSLP18 agus fágtar iad ar feadh 2 sheachtain ag teocht an tseomra, ag croitheadh na bhfleascán gach 3 lá. Tar éis 2 sheachtain, triomaíodh na gráin sorgham a raibh fungas orthu san aer agus stóráladh iad ag 4 °C go dtí go ndearnadh ionaclú allamuigh orthu. Baineadh úsáid as an ionaclú céanna don triail ar fad agus rinneadh úr é gach bliain. Chun ionaclú, cuireadh 6-10 grán ionfhabhtaithe i gcroílár na bplandaí sorgham 4-5 seachtaine d'aois. Chuir na spóir a tháirgtear ó na fungais seo tús le hionfhabhtú sna plandaí sorgham óga laistigh de sheachtain.
Ullmhú síolta
Sula ndearnadh an síol sorghum a phlandáil sa pháirc, rinneadh meascán fungaicíd, feithidicíd agus sábháilteora a úsáid ina raibh ~1% fungaicíd Spirato 480 FS, 4% fungaicíd Sebring 480 FS, agus 3% sábháilteoir síolta Sorpro 940 ES. Ansin, triomaíodh na síolta san aer ar feadh 3 lá, rud a chuir sciath tanaí den mheascán seo timpeall na síolta. Chuir an sábháilteoir ar chumas an luibhicíd Dual Magnum a úsáid mar chóireáil réamh-theacht chun cinn.
Meastóireacht ar fhriotaíocht Spota Duille Spriocdhírithe
Cuireadh an SCP ag an Stáisiún Taighde Barra Lárnach i Clayton, Carolina Thuaidh ar an 14–15 Meitheamh 2017 agus ar an 20 Meitheamh, 2018 i ndearadh bloc iomlán randamach le dhá mhacasamhlú turgnamhach i ngach cás. Cuireadh na turgnaimh i sraitheanna aonair 1.8 m le leithead sraithe 0.9 m ag baint úsáide as 10 síol in aghaidh an phlota. Cuireadh dhá shraith teorann timpeall imeall gach turgnaimh chun éifeachtaí imeallacha a chosc. Rinneadh na turgnaimh a ionaclú ar an 20 Iúil, 2017 agus ar an 20 Iúil, 2018 agus ag an bpointe sin bhí na plandaí sorgham ag céim fáis 3. Tógadh rátálacha ar scálaí aon go naoi, áit ar scóráladh plandaí nach raibh aon chomharthaí galair á léiriú mar naoi agus scóráladh plandaí go hiomlán marbh mar aon. Tógadh dhá rátáil in 2017 agus ceithre léamh in 2018 ag tosú dhá sheachtain tar éis an ionaclú gach bliain. Ríomhadh sAUDPC (limistéar caighdeánaithe faoi chuar dul chun cinn galair) mar a thuairiscíodh roimhe seo.
Am an phoist: 1 Aibreán 2021